开云体育(中国)官方网站1500×g 离心 10 分钟取上清-开云(中国)Kaiyun·官方网站

本質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)前，抗東說念主軟骨糖卵白 39 抗體早已在微孔酶標(biāo)板上設(shè)下 “羅網(wǎng)”。當(dāng)加入 HCgp-39 校準(zhǔn)品和待測樣本時(shí)，HCgp-39 就像 “小謀劃”，自動(dòng)與抗體相連。接著，HRP 象征的抗東說念主軟骨糖卵白 39 抗體也加入其中，釀成踏實(shí)的 “夾心復(fù)合物”。經(jīng)過溫育和洗滌，去除未相連的因素后，加入底物 A 和 B，在 HRP 的催化下，底物從無色變?yōu)樗{(lán)色，再加入遠(yuǎn)離液（2M 硫酸），俄頃變成黃色。黃色越深，標(biāo)明樣本中的 HCgp-39 越多。終末，通過酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），就能想象出樣本中 HCgp-39 的濃度。

本質(zhì)前，要提前 2 小時(shí)將試劑盒和樣本從雪柜取出，使其在室溫下充分復(fù)溫。從雪柜取出的濃縮洗滌液若有結(jié)晶，放在溫水浴中加熱使其融解，再按 1:20 的比例用蒸餾水稀釋。底物液 A 和 B 需在使用前按 1:1 的體積攙雜，且在 15 分鐘內(nèi)使用。

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本質(zhì)還需要酶標(biāo)儀（450nm）、精密移液器及一次性吸頭、蒸餾水、洗瓶或自動(dòng)洗板機(jī)、37℃水浴鍋或恒溫箱、500ml 量筒等物品。

樣本網(wǎng)絡(luò)后，細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清、血漿王人要在 4000rpm 要求下離心 20 分鐘，上清液保存在 - 20℃以下，幸免反復(fù)凍融。組織勻漿需用預(yù)冷 PBS 沖洗組織、剪碎后按 1:9 比例與 PBS 攙雜研磨，可超聲幻滅或反復(fù)凍融，5000×g 離心 5-10 分鐘取上清。細(xì)胞索要液的獲得，貼壁細(xì)胞經(jīng) PBS 清洗、胰卵白酶消化后離心網(wǎng)羅，懸浮細(xì)胞徑直離心網(wǎng)羅，細(xì)胞用 PBS 洗滌 3 次，重懸后反復(fù)凍融，1500×g 離心 10 分鐘取上清。其他生物體液則在 1000×g 離心 20 分鐘后取上清檢測。

操作時(shí)，先配制好職責(zé)液，從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的密封放回雪柜。建造好范例品孔、0 值孔、空缺孔和樣本孔，加入相應(yīng)液體后，加入 HRP 象征的檢測抗體，用封板膜蓋住響應(yīng)板，在 37℃避光孵育 60 分鐘。之后進(jìn)行洗板，若用自動(dòng)洗板機(jī)，難忘添加 30 秒浸泡活動(dòng)。將底物攙雜后加入各孔，再次避光孵育 15 分鐘，終末加入遠(yuǎn)離液，在酶標(biāo)儀 450nm 波長上讀取 OD 值。

以范例品濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，用想象機(jī)軟件擬合創(chuàng)建范例弧線方程，通過樣本吸光度想象濃度值，若樣本稀釋過，需乘以稀釋倍數(shù)。

使用試劑盒時(shí)，要在有用期內(nèi)使用，不與其他廠家試劑盒或組分混用，用配套樣品稀釋液。操作經(jīng)由中，幸免卵白溶液起泡，加樣換槍頭，保證溫育技術(shù)和洗滌充分，掃視底物和遠(yuǎn)離液的使用要求，剩余板條密封低溫干燥保存。同期，要掃視生物安全開云體育(中國)官方網(wǎng)站，推辭交叉羞恥，幸免試劑斗爭皮膚和吸入煙霧，本質(zhì)時(shí)戴手套，規(guī)模后洗手。

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